Expérience GFP-Catalase

[melatonine]

Bonjour !

Dans la ronéo 4 page 10, quelque chose m'échappe par rapport à cette expérience (surtout au niveau des images)

1) Expression dans un fibroblaste de patient d'une protéine hybride GFP-Catalase

On observe une répartition diffuse de la catalase dans toute la cellule (noyau + cytoplasme) car les peroxysomes sont non fonctionnels !

2) GFP-Catalase + gène PEX1 sauvage (-> peroxysomes fonctionnels)

On observe une répartition en "petits organites".

Je comprends pas trop cette image, car on voit pas mal de fluorescence à l'extérieur des cellules, alors que les peroxysomes sont fonctionnels. (On voit de la fluorescence un peu partout à vrai dire... Je comprends pas trop pourquoi )
La catalase n'est-elle pas censée se retrouvée seulement à l'intérieur, de la cellule d'une part et des peroxysomes d'autre part ... ?


Merci d'avance pour votre réponse. Bisous

[MrCitron]

Coucou Melatonine

Comment vois-tu que ta fluorescence est à l'extérieur de tes cellules? La membrane n'étant pas fluorescente tu ne peut pas savoir si tu es à l'intérieur ou non
Je suis ok avec toi pour dire que c'est un bordel monstre sur cette photo, mais la chose à voir c'est que ta fluorescence, au niveau du cytoplasme se condense sous forme d'amas, étant donné que ta protéine est une protéine que l'on retrouve normalement dans les paroxysmes, tu pense fortement que ces amas sont en faites des paroxysmes (étant donné que ta maladie est de type récessive et que tu as supplanté la mutation par l'introduction d'une version sauvage du gène)

C'est bon pour toi? Bonne journée

[melatonine]

Salut MrCitron!

J'en déduis que c'est à l'extérieur de la cellule, car pour moi les 2 photos représentent les 2 mêmes cellules, dans des conditions différentes ^^ On ne fait pas tout le temps comme ça en expérience ? En général on peut superposer ... ?



Du coup je me suis demandée autre chose.. Peut-être que les 2 amas fluorescents que l'on voit ne représentent pas des cellules, mais des peroxysomes.

Dans ce cas il faudrait INVERSER ces 2 images ! Et du coup, ça paraîtrait beaucoup plus logique par rapport aux explications qu'il y a à côté ...


Merci pour ta réponse

[MrCitron]

Comme tu l'as dit on se trouve dans des conditions différentes, donc tes cellules ne sont pas à 100% comme sur la photo précédente ^^

Je pense aussi qu'une différence d'échelle est présente sur cette photo, la photo n°2 semble avoir été prise avec un zoom plus fort que la photo n°1, de toutes façon ne te prends pas la tête avec ça, il faut que tu comprennes le raisonnement générale de cette expérience pour comprendre les interprétations faites

Bonne journée

[melatonine]

Re!

Désolée de t'embêter avec ça, mais j'essaye vraiment de la comprendre .. Le professeur Gilson ayant fait tomber une expérience de cours l'an dernier ...

Tu penses que ce serait possible de demander au prof de nous réexpliquer / de reformuler cette expérience de peroxysome non fonctionnel, car là ça me paraît vraiment bizarre

Bisous

[MrCitron]

Coucou Melatonine

Nous essayerons d'en discuter avec le Pr. mais je ne suis pas sûr qu'il puisse refaire toute la partie sur le Syndrome de Zellweger
Par contre j'ai trouvé une image qui peut peut être t'aider

s008259-bp70-journalclub1.jpg (108.7 Kio) Vu 238 fois

C'est une image par fluorescence ou on visualise des peroxysomes, comme tu peux le voir on voit pleins de petits amas, et ici non plus on ne visualise pas les membranes plasmiques (bon ici c'est quand même plus facile les noyaux sont dans une autre couleur), l'image que vous avez dans la ronéo montre deux cellules qui se chevauchent l'une l'autre, donc en fait l'espèce d'effet dégueulasse qu'on retrouve est juste lié au faite qu'on voit des amas peroxysomaux de la cellule d'au dessus mais aussi de la cellule d'en dessous.

Tu visualises ce que je veux dire?

Bonne journée

[melatonine]

Bonsoir MrCitron !!!

Grâce à ton image je comprends beaucoup mieux.
Il faut en fait juste conclure que l'on voit des points fluorescents distincts, correspondant aux peroxysomes fonctionnels...
Désolée de t'avoir embêté avec ça.

Merci pour toutes tes réponses, ta patience, et la fiche sur la voie NER, et la fiche sur analyses génétiques.. Parce que la ronéo 5, c'était vraiment pas possible !

Vive la biocell