Recombinaison

[Brynn]

Bonjour!!

Quelques petites questions concernant le cours de biocell

Un gène recombiné homologiquement introduit-il toujours l'inactivation du gène auquel il s'associe? (donc son KO)

Autrement dit, est-ce que quand le gène est recombiné 1) il s'associe à l'ADN, donc il s'exprime et tous les autres gènes de l'ADN initialement présents s'expriment
2) ou si le fait qu'il soit recombiné empêche une partie d'ADN de s'exprimer? (la partie sur laquelle il s'associe)

Autre question: dans le KO, en quoi le fait de cribler beaucoup nos cellules fera que seules celles ayant integré la séquence par recombinaison homologue subsisteront? Puisque notre séquence, même si elle est intégrée illégitimement exprimera le gène PURO, non?

Voila des questions toute bêtes...

Si un(e) super tuteur/tutrice pouvait également m'expliquer le principe du knock-in ce serait le top ^^ ...la ronéo de ce cours n'étant pas trop compréhensible...

Merci beaucoup!!

[MrCitron]

Coucou Brynn

Alors oui le principe de la recombinaison homologue c'est qu'on va induire le K.O d'un gène, mais en général ce K.O est recherché (pour voir à quoi sert ce gène, à des visées thérapeutiques ...)
En se recombinant la portion d'ADN qui était là initialement ne disparait pas, elle se retrouve dans le nucléoplasme, mais après un certains nombre de division elle va disparaitre (un peu comme tes transgènes dans le cas de la recombinaison illégitime)

Pour ta question sur le K.O, le criblage est une technique permettant de connaître l'enchainement nucléotidique présent dans ton ADN, donc en criblant tes cellules tu peux savoir à quel endroit ton transgène c'est intégré et savoir lesquels ont intégrés de façon légitime ce transgène

Pour le K.I, je vais vous sortir une fiche reprenant la ronéo 5 d'ici la fin de l'après-midi, mais en gros le K.I c'est quoi? Tu greffes un moyen de repérer tes protéines à ton gène et tu observes où est-ce que cette protéine s'exprime de manière physiologique, ça te permet de quantifié son expression selon les tissus ...

C'est bon pour toi? Bonne journée

[Brynn]

D'accord, merci beaucoup! (et merci pour la fiche également!! )

Mais dans le cas de la recombinaison illégitime le transgène n'est pas perdu au fil des divisions il me semble (je pense que ça doit etre une erreur ou bien j'ai mal compris)

[PepL]

En effet tu as raison le transgene dans le cas de la recombinaison illégitime n'est pas perdue au fil des divisions tout comme dans le cas de la recombinaison homologue. Mais Remy parlait de la portion initiale du gène qui a été "remplacée" par ton transgene, elle se retrouver libre au niveau du nucleoplsme et sera au fur des divisons cellulaires, perdue car non intégré à ton génome.
Bon pour toi ?

[Brynn]

D'accord autant pour moi j'avais mal compris...

Merci pour ces explication très claires en tout cas, c'est bon pour moi!!