b-galactosidaseB

[thedarmani]

Bonsoir!

Il y a une partie que je n'ai pas bien sasie , a propos de la B galactosidase, je ne vois pas en fait a quoi sert cette coloration ni le fait que ca soit exprimé ou non;

en esperant que quelqu'un puisse m'eclairer

Merci d'avance!

[pimmipimbi]

Cc
Alors en premier avec la pénicilline tu à éliminer les bactéries n ayant pas intégrer le plasmide (l ADN circulaire ayant dans son génome le gène de résistance à la pénicilline )
La avec la B galactosidase tu regarde les bactéries avec un plasmide certe mais un plasmide qui a integrer le bout d ADN que tu veut étudier
En effet l endroit où ton ADN s incere est "au milieu " du gène codant pour la B galact donc les bactéries exprimant la B galactosidase ont un plasmide mais sans notre bout d ADN
Voilà

[Sow~]

Hello!

Merci pimmipimbi pour ta réponse!!
Je vais juste un peu détailler certains points

Alors en fait, lors du clonage moléculaire, sur ta boite de pétri tu peux avoir trois "sortes" de bactéries différentes :
Bactéries ayant intégré le plasmide avec l'insert (1)
Bactéries ayant intégré le plasmide sans insert (2)
Bactéries non transformées, sans plasmide ni insert (3)

Les seules qui nous intéressent pour notre étude, ce sont les bactéries qui ont intégré le vecteur avec le fragment d'ADN (1), donc pour les isoler, il faut qu'on se débarrasse des bactéries 2 et 3 qui ne nous servent à rien.

Pour éliminer les bactéries non transformées (3), on rajoute à notre milieu un antibiotique car sans gène de résistance (car sans vecteur), elles ne pourront pas proliférer et former de colonies.

Pour éliminer les bactéries ayant intégré le vecteur sans le fragment d'ADN (2), on utilise la Sélection Blanc / Bleu qui va permettre de colorer en bleu les bactéries qui ne nous intéressent pas.
- Avec les plasmides sans insert (2) : Le gène de la ß-galactosidase (en bleu) est intact et peut s'exprimer. -> La ß-galactosidase hydrolyse X-Gal et on obtient une coloration bleue.
- Avec les plasmides avec insert (1) : L'insert (en rouge) s'insère au milieu du gène de la ß-galactosisase (en bleu) et le coupe en deux. -> La ß-galactosidase est non fonctionnelle et les colonies restent blanches. -> C'est elles qu'on va récupérer pour la suite de notre étude.

C'est plus clair?

[thedarmani]

Merci a vous deux, c'est super clair!