Coucou! 
Alors, oui cette partie est pas très claire...
Mais ce que tu dois retenir pour la méthode de Sanger, c'est qu'on a
4 réactions indépendantes, et que dans chaque tube on trouve :
- Le fragment d'ADN à séquencer
- L'ADN polymérase
- L'amorce
- Les 4 dNTP différents (A, T, G, C)
-
UN SEUL ddNTP radiomarqué (c'est-à-dire 1 ddNTP différent pour chaque tube)Dans chaque tube, la polymérase va synthétiser des brins de
différentes tailles en fonction du moment où un
ddNTP (qui stoppe la réaction) est incorporé au lieu d'un dNTP.
(L'ADN polymérase incorpore au hasard soit un dNTP, soit un ddNTP.)
Et une fois qu'on aura réalisé plusieurs cycles successifs
(dénaturation, hybridation, élongation), on va faire migrer séparément
(dans différentes "pistes") par électrophorèse nos produits synthétisés.
Les fragments sont donc
séparés en fonction de leur taille, et en fonction de la "colonne" dans lequel se trouve le fragment on saura de quel nucléotide il s'agit.
Et donc pour avoir la séquence de notre ADN, on va
lire de bas en haut, c'est-à-dire
du plus petit fragment au plus grand.
Il y a cette vidéo qui montre bien comment fonctionne la méthode de Sanger, et comment on lit la séquence du fragment d'ADN à la fin :
https://www.youtube.com/watch?v=qr6A4eXZOWsEst-ce que c'est plus clair?
