Tutorat 9 QCM 3 ITEM D

[Bhaiya]

Coucou et merci pour cette séance

À propos de cet item sur le sequencage, "La lecture de la séquence d'ADN se fait après migration électrophorétique par détection des différents fluorochromes".

Je l'ai compté faux car je pensais qu'avec la méthode de Sanger on utilisait les séquenceurs capillaires pour justement séparer les nucléotides colorés ?

J'espère avoir été claire, merci ^^

[Sow~]

Coucou!


En fait, on a fait ce QCM à partir du Diapo, et c'est ça qu'on lit :

On utilise un champ électrique pour séparer les fragments d'ADN, c'est la migration électrophorétique.


Pour ta question il y a ce récap qui résume bien cette partie :

Méthode Sanger :
- Utilisation de ddNTP radiomarqués
- 4 réactions indépendantes séparées pour ne permettre l'incorporation que d'un seul type de ddNTP par tube, donc 4 tubes différents
- Ajout sur un gel pour migration élécrophorétique de chacun des tubes pour avoir une lecture de la séquence en commencent par le bas du gel afin de commencer par le plus petit fragment

Méthode actuelle : (inspiré du principe de la méthode Sanger)
- Utilisation de ddNTP couplés à un fluorochrome
- 4 réactions dans un même tube donc mélange de 4 types de ddNTP dans un même tube
- Migration éléctrophorétique du contenu du tube

Séquenceur automatique :
Même principe que la méthode actuelle sauf que l'on fait passer les brins d'ADN dans un système de migration par capillaire avec une lecture laser à la fin.

Est-ce que c'est plus clair?

[Bhaiya]

Parfait! Le recap est nickel! Merci