PCR en émulsion

[Hemmatie]

Salut !
Dans la roneo 3 de l'année derniere lors de l'hybridation entre l'ARN biotinylé et l'ADN on dit que l'ADN est simple brin puisqu'il a été dénaturé

Et ensuite on fait la PCR en émulsion et on recommence une dénaturation au tout début mais je vois pas pourquoi car l'ADN était deja simple brin quand on a fait notre préparation d'échantillon non?

Merci d'avance !!

[Luffylink]

Salut

Ce que tu dis est vrai, à l'exception d'un détail que tu as oublié :3

Si j'essaye de résumer la chose : le premier cycle complet de PCR, a été :
Dénaturation du fragment d'ADN double brin issu de la première synthèse du brin complémentaire à la séquence d'ADN (juste après son introduction dans le mini-réacteur)
Hybridation du primer biotinylé à un des brins d'ADN à son extrémité 3'
Elongation de ce primer biotinylé, dans le sens 5' - 3'

Les cycles suivants de PCR partent donc de ce fragment d'ADN double brin avec un brin à l'extrémité biotinylisée

C'est plus clair ?

[Hemmatie]

Ha d'accord merci !!

[madalou]

Salut! Desolee mais je n'ai pas compris ton explication: pourquoi avant meme de faire la PCR on denature?

[Drndamelie]

Salut, j'aimerais bien aussi une explication supplémentaire aussi mercii

[Luffylink]

Faites un nouveau post, je vous prie :')

Cela n'est pas affiché sur la diapo, je l'ai fait remarquer au prof :
Dans la diapo 13, ou sur l'image de la page 6 de la ronéo, sur le micro-réacteur le fragment d'ADN à séquencer est double brin

Il faut donc le dénaturer pour qu'il soit simple brin pour commencer la PCR (cela en est également la première étape)
Et c'est ce que j'ai détaillé dans ma première réponse

C'est mieux pour vous ?