Enzyme restrictions

[Alicia Mi]

Salut, à propos du clonage moléculaire, on nous parle de cas où la digestion se fait par des enzymes de restrictions générant des extrémités franches et du coup le vecteur se referme sur lui-même
Pourquoi est-ce qu'on utilise ce genre d'enzymes (comme SmaI) alors qu'avec celles qui ne font que des extrémités cohésives comme ecoRi, on aurait pas ce problème de ligation..?
Merci d'avance

[Nom_de_Zeus!]

Hey !

Le plus important que tu dois retenir c'est que les enzymes de restriction peuvent générer des bouts francs et des bouts cohésifs ça n'ira pas chercher plus loin que ça en qcms

Maintenant pourquoi utiliser des enzymes qui génèrent des bouts francs, déjà parce que le plasmide ne va pas toujours se refermer sur lui-même sans l'insert il y a des cas où tu vas très bien arriver à générer des ADN recombinants (c'est-à-dire que le plasmide aura intégré l'insert) en utilisant des coupures à bouts francs !
Ensuite il faut savoir que certains plasmides ne possèdent pas de sites de restriction permettant d'utiliser des enzymes générant des bouts cohésifs, on n'a alors pas le choix et on est obligés d'utiliser des enzymes générant des bouts francs (tout dépend vraiment de ce qu'on veut faire, de notre insert...)
Dernier point, quand tu génère des bouts cohésifs, tu dois t'assurer que les extrémités cohésives du plasmide correspondent aux extrémités de l'insert, ce qui implique de trouver une seule et même enzyme de restriction capable de digérer à la fois l'insert et le plasmide, ce qui n'est pas toujours le cas ! Parfois il n'existe pas de site de restriction pour une enzyme capable de digérer spécifiquement les extrémités de l'insert, on n'a alors d'autre choix que de passer par des bouts francs !

Voilà pourquoi les extrémités à bouts francs peuvent toujours conserver une certaine utilité et qu'on ne peut pas s'en affranchir toujours !

C'est clair ?

[Alicia Mi]

Dacc je comprends, merci beaucoup !