PCR Clonage

[Hichem]

Hey ! J'ai pas bien compris la différence entre Clonage et PCR, help

[Nom_de_Zeus!]

Hey !

Je t'avoue que ta question est beaucoup trop vague, les deux techniques n'ont rien à voir...
La PCR a pour but d'amplifier le matériel génétique du patient avant de commencer à le manipuler.
C'est indispensable parce qu'on prélève des quantités infimes d'acides nucléiques, on travaille souvent avec l'équivalent d'une cellule (on a des quantités d'ADN de l'ordre du nanogramme). Imagine que l'on fasse une mauvaise manipulation (due à une contamination par exemple), on aura donc gâché notre matériel génétique et on ne pourra pas refaire de tests ensuite ! Il faudra reprélever du matériel sur le patient ce qui est contraignant.
On s'arrange donc pour obtenir une grande quantité d'ADN avant de commencer à travailler dessus en amplifiant spécifiquement la région qui nous intéresse !

Le clonage moléculaire sert à certes amplifier le matériel génétique, mais surtout à séparer les allèles du gène d'un patient quand on a un variant d'épissage ! Le séquençage est en effet tout d'abord illisible car on a séquencé les deux allèles en même temps, il faut donc les séparer dans des bactéries grâce au système de vecteurs et d'ADN recombinant, les amplifier dans le même temps, et ensuite les séquencer séparément pour trouver les mutations des deux allèles afin de pouvoir interpréter ce séquençage !

Le clonage d'expression (car oui il y a deux types différents de clonage qui n'ont rien à voir) consiste à faire exprimer une protéine de force dans une cellule eucaryote après amplification du matériel dans une cellule procaryote (alors que le clonage moléculaire se fait du début à la fin dans une cellule procaryote uniquement).
Le but n'est pas de séparer, d'amplifier et de purifier le matériel génétique, on veut forcer la cellule à exprimer une protéine mutée pour voir où elle s'exprime et comment elle se comporte. Le but de ce clonage est de nous permettre d'interpréter l'effet d'une mutation sur une protéine que l'on a marquée pour pouvoir la repérer au microscope: on parle de protéine de fusion.

Je t'invite vraiment à lire le cours et à reposer une question plus précise si tu ne comprends toujours pas, dis moi si c'est bon