types de coupures

[Léanaphase]

Salut!
Concernant les deux types de coupures possibles, il est dit que les coupures à bout cohésifs sont plus facile à recoller par la suite par une ligase, mais je ne comprends pas pourquoi... Si quelqu'un pouvait m'expliquer, merci d',avance

[Nom_de_Zeus!]

Hey !

Alors c'est tout bête, déjà qu'est-ce qui distingue les bouts francs des bouts cohésifs ? Les extrémités simple brin sortantes !

Je te rappelle que lors de la préparation d'un ADN recombinant, on s'arrange pour que la même enzyme de restriction digère le vecteur et l'insert, pour s'assurer qu'il y a une complémentarité entre les extrémités cohésives du vecteur et celles de l'insert, pour que les deux s'emboîtent parfaitement comme un puzzle si tu veux !

Du coup si tu mets dans un même milieu réactionnel ton vecteur et ton insert (qui ont tout deux des extrémités cohésives "complémentaires" car ils ont été digérés par les mêmes enzymes de restriction) mais dans un premier temps SANS la ligase, et bien il va quand-même y avoir un assemblage spontané entre insert et vecteur par appariement de bases complémentaires entre les nucléotides des extrémités sortantes simple brin du vecteur et de l'insert !
On assiste spontanément à la formation de liaisons hydrogène entre l'insert et le vecteur au niveau de leurs portions simple brin respectives (là où les bouts sont cohésifs) puisqu'on est supposé avoir une complémentarité entre les deux !

La ligase est censée synthétiser des liaisons de type phosphoester entre les nucléotides d'un même brin qui sont beaucoup plus résistantes que les liaisons hydrogène des brins complémentaires.

Comme l'insert et le vecteur sont à extrémités cohésives ils ne sont pas strictement double brin sur toute leur longueur, d'où le fait qu'on puisse avoir un premier appariement entre insert et vecteur entre les brins complémentaires de l'ADN recombinant, mais pas entre l'insert et le vecteur sur un seul et même brin !

Lorsque la ligase arrive les deux fragments qu'elle doit attacher sont déjà appariés mais uniquement par des liaisons hydrogène entre brins complémentaires qui ne sont pas solides, elle doit donc consolider l'ensemble en synthétisant des liaisons covalentes entre les deux fragments "linéairement", entre deux nucléotides de la séquence d'un seul et même brin !

C'est bon ?

[Léanaphase]

c'est parfait, merci beaucoup