Méthode Sanger

[sansa]

Hey

Je n'arrive pas à comprendre pourquoi dans la méthode de Sanger on utilise la radioactivité: des ddNTPs radiomarqués (étant donné que chacun est dans un tube ce qui permet de les différencier)?

[louuu]

Hello !

On utilise des ddNTPs radiomarqués de façon à repérer le nucléotide utilisés lorsqu'on met les 4 tubes à migrer ensemble sur le gel, c'est ce que j'ai compris moi, si t'es pas d'accord je peux essayer de t'expliquer plus en détail ou demander à la Prof

Bonne soirée !

[sansa]

Merci pour ta réponse !

C'est ce que je pensais aussi mais dans ce cas là pourquoi ne pas utiliser du bromure d'éthidium ?

[Nom_de_Zeus!]

Hey !

Le bromure d'éthidium permet de révéler l'ensemble du produit d'amplification sur une électrophorèse mais pas de vérifier que le ddNTP a bien été incorporé et que la terminaison de l'élongation est bien due à son incorporation dans la séquence et pas à un souci au niveau des réactifs dans le tube

L'avantage du radiomarquage est qu'il ne permet de ne repérer que les ddNTP spécifiquement alors que le bromure d'éthidium ne permettrait pas de s'assurer qu'on a bien un terminateur de chaîne à chaque fois

[sansa]

C'est parfait j'en comprends mieux l'utilité, merci !!!!