Hey !
Le terme de "PCR multiplexe" désigne une mise au point de la technique PCR autorisant l'amplification en une seule réaction de plusieurs segments d'ADN distincts
Les couples d'amorces correspondant aux différents locus à analyser sont introduits dans le même tube réactionnel
Alors que la PCR standard utilise généralement une paire d’amorces pour amplifier une séquence spécifique, la PCR multiplex utilise des paires multiples d’amorces pour amplifier simultanément un grand nombre de séquences
Et là tu te dis "c'est quoi l'embrouille on me dit après qu'on utilise un seul couple d'amorces pour tous les fragments et là on me dit qu'il y a une paire d’amorces pour chaque séquence et que ça revient au même ?"
En fait oui, ça revient bien au même
Si tu veux la PCR multiplex fait partie intégrante de la PCR - clonale, c'est juste une étape qui vient juste avant pour nous permettre d'utiliser les mêmes couples d'amorces pour des séquences d'ADN différentes, et justement pour pouvoir "harmoniser" tout ça et n'utiliser qu'un seul couple il faut au départ en utiliser plusieurs pour faire une sorte de lien, de transition si tu veux entre des amorces spécifiques et des amorces universelles !
Je m'explique:
- La première étape (A sur le schéma) consiste à utiliser un primer sens qui a une portion spécifique de chaque brin d'ADN et une portion (en noir) identique pour tous les fragments, mais plutôt que d'utiliser des ligases pour attacher bêtement la partie noire à une extrémité du brin on utilise cette technique (dans la pratique après il faut utiliser une nucléase pour découper la séquence, insérer au milieu le barre code et on lie le tout avec une ligase, mais d'habitude la prof ne parle pas de la PCR multiplex du coup on simplifie en vous disant que la ligase sert d'emblée à tout lier ensemble, oubliez la PCR multiplex pour le concours c'est un détail sans aucune importance et retenez que PCR - clonale = PCR - multiplex)
- La deuxième étape consiste à faire pareil avec un primer sens qui a une portion spécifique du brin à amplifier et une autre portion universelle (en rose/mauve, différente de la première en noir)
- On amplifie le tout n fois (je ne te redétaille pas, on suit des règles de complémentarité beaucoup trop longues à expliquer et inutiles déjà tout ça normalement c'est hors programme) et on obtient ainsi nos échantillons prêt pour la PCR en émulsion ! (la PCR multiplex est différente de la PCR en émulsion puisque le but ultime de cette dernière est d'hybrider nos brins à une sphère c'est pour ça que l'une ne peut pas remplacer l'autre)
Mais vraiment oublie tout ça tu vas t'embrouiller pour rien la PCR multiplex on s'en fout retiens les étapes classiques "simplifiées" et pour ta culture G tu sauras que c'est une version simplifiée et qu'en vrai y'a aussi la PCR multiplex
Non le
séquençage individuel des sphères n'utilise qu'une seule amorce absolument pas un couple, ce n'est pas de la PCR mais du séquençage classique à la différence près qu'on utilise des variations de pH à la place de ddNTP !
ATTENTION règle universelle :
séquençage sous toutes ses formes => 1 amorce
PCR sous toutes ses formes => 2 amorces
En plus avant le séquençage il y a une dénaturation des brins donc on se retrouve avec uniquement des simples brins qui ont une amorce libre d'un côté, l'autre étant le primer fixé à la sphère qui est par conséquent inutilisable sont seul rôle est de constituer un point d'ancrage
C'est bon ?
