knock-in

[BatBouut]

bonjour

je comprend pas trop le KNOK-IN : psk on dit qu'en gros on va tracer un gène ( ici HoxB8) grâce à un autre gene qui est le lacZ qui est marqué pas le X-gal ( x-gal c'est le produit de lacZ??? )

bon ce que je comprend c'est comment ça c'est grace à lacZ ? il est vont etre lié et former un hybride ??et comment ? je comprend pas trop

merci d'avance

[Starman]

Salut
Je vais essayer de t'expliquer au mieux : un Knock-In consiste à insérer un gène dans une cellule/dans un organisme pour exprimer un gène en plus, tracer un autre gène...

Ici on veut tracer HoxB8 pour savoir où ce gène agit. Pour cela on incorpore le gène LacZ (qui code pour la Beta-Galactosidase) au niveau du gène HoxB8 dans une cellule-oeuf de souris. Il faut savoir que la Beta-Galactosidase fait réagir le X-gal et le fait devenir bleu. Du coup lorsqu'on donne du X-gal au foetus de souris, il réagit avec la Beta-Galactosidase, qui se trouve là où HoxB8 agit, et se colore en bleu uniquement dans ces zones là.

Si tu n'as toujours pas compris je peux te réexpliquer

[BatBouut]

j'ai pas tout compris X-gal c'est le produit du gène HoxB8?

[Starman]

Nan en fait X-gal c'est une molécule que l'on va donner à la souris et qui va réagir avec la bêta-galactosidase

[BatBouut]

mercii je comprend mieux,
ça veut dire que X-gal va interagir avec la beta-galactosidase qui elle même va interagir avec la protéine du gène HoxB8?
c'est ça ?

[Starman]

Nan en fait vu que tu insères le gène de la bêta-galactosidase (lacZ) sur la gène HoxB8, la beta-galactosidase va se retrouver au même endroit que la prot synthétisée par HoxB8, et donc quand tu vas donner X-gal à ta souris elle va interagir avec la bêta-galactosidase (qui se trouve à l'endroit où agit HoxB8), et se colorer en bleu à cette zone

[BatBouut]

d'accord ça j'ai compris merci bcp
ici le gène rapporteur c'est lacZ ? et le gène de sélection c'est HoxB8?
on va faire un ajout ciblé vu que va le faire exprimer avec le même promoteur que HoxB8? on aura donc une expression naturel ?

desoleeee mais je comprend tjrs pas trop de KI :'(

[Starman]

Alors ici on a pas mentionné de gène de sélection, du coup dans ce cas tu t'en fous ils en parlent pas dans cette expérience.
HoxB8 c'est un gène qui est naturellement présent chez la souris, et on fait un KI (c'est à dire qu'on insère le gène de lacZ au niveau du gène HoxB8).
Le gène rapporteur c'est bien lacZ.
Oui c'est bien une insertion ciblée, vu qu'on insère lacZ spécifiquement au niveau de HoxB8.
Je comprends pas exactement ce que tu veux dire par expression naturelle... parce qu'en soit on a quand même inséré un gène qui n'est pas présent naturellement chez la souris...

[BatBouut]

merccii bcp c'est parfait pour l'expérience
mais on parle bien du gène de sélection

[Starman]

Je voulais dire que dans cette expérience là (insertion du gène HoxB8) on ne mentionne pas de gène de sélection.

Sinon bien sûr il mentionne le gène de sélection dans le cours sur le KI.