Technique de la Caspase 3

[Tom_vdlg]

Salut,

Je ne comprend pas trop la technique de la caspase 3 de la ronéo de 2018, pourquoi une fois quand on met de la caspase 3 (puits 7 à 11) on a apoptose et dans les autres puits quand on en met on a pas apoptose (puits 2 à 6). Je croyais que c'était les caspases effectrices qui déclenchaient l'apoptose alors pour quoi sur certaines ça marche et d'autres non ?

Merci d'avance, Tom.

[titouf]

Coucou !
C'est tout simple, je vais t'expliquer 😉
Rappel: la caspases 3 est une caspase initiatrice qui va cliver les caspases effectrices qui elles mêmes vont cliver differentes protéines.

-> Dans les puits 2 à 6 : On ajoute la caspase 3 et on laisse la réaction se faire. Cependant on ne l'a laisse PAS ASSEZ LONGTEMPS pour observer l'apoptose.

-> Dans les puits 7 à 11: Là on augmente le temps de réaction !! Donc les caspases initiatrices ont le temps d'aller cliver les caspases effectrices qui ont le temps d'aller tout couper.

Cette expérience veut nous montrer que le processus d'apoptose n'est pas un processus instantané : ça prend du temps tout simplement 😉 (Gilson dit 1 jour si ma mémoire est bonne)
Tu verras mardi prochain que j'ai tout bien expliqué dans ma ronéo si tu doutes encore!

C'est boooon tu as tout compris ?

[Tom_vdlg]

Hein euh attend je comprend pas là dans le cours il y a écrit que caspase 3 est effectrice et il y a ecrit pareil sur ta fiche de la TTR et sur internet ?

Aussi sur la photo de l'expérience dans la ronéo il y a écrit les mêmes temps c'est de là que vient mon incompréhension justement

[titouf]

Ducoup j'ai compris ce qui te posais problème.

D'abord tu as raison, je me suis emmêlé les pinceaux en lisant trop vite. Donc caspase 3 = caspase effectrice !! A bien différencier de caspase initiatrice.

Pour le reste il faut plutôt suivre ce resonnement (donc oublie celui que je t'ai dit avant, je l'avais fait sans regarder la ronéo)

-> Dans cette expérience on veut DIFFERENCIER une cellule apoptotique d'une cellule normale. Nous disposons de 2 cultures cellulaires.
Pour les cellules normales : On a un témoin (puit 1), on note alors son poids en kb. On prend la première culture cellulaire a tester et on introduit la caspase 3.
✓ On remarque que dans cette culture, la migration est exactement la même que celle du témoin négatif indépendamment du temps. CCL: les cellules sont normales car elles n'ont pas fragmentés leur ADN.

-> Pour les cellules en apoptose: On test maintenant la culture 2 dans les mêmes conditions : cette fois, l'ADN est fragmenté. C'est un marqueur d'apoptose. Les cellules de la culture 2 sont donc apoptotiques.

✓ Nous venons bien de différencier 2 cultures cellulaires pour déterminer laquelle était normale, et laquelle était en apoptose.

Tu as compris ?

[Tom_vdlg]

Ah ok je crois que ce qui m'empêchait de comprendre cet expérience c'est que moi j'avais compris que la caspase 3 déclenchait l'apoptose en mode si on met de la caspase 3 dans la cellule elle devient apoptotique. Mais du coup la c'est juste dans une cellule normale ça va rien faire mais dans une cellule apoptotique ça va contribuer à son apoptose c'est ça ?

[titouf]

Oui c'est ça tu as bien compris ☺️
La caspase 3 a elle toute seule ne permet pas de carrément déclencher l'apoptose

[Tom_vdlg]

D'accord merci beacoup