Séquençage sanger

[Tom_vdlg]

Salut,

Je suis pas sûr d'avoir bien compris le mécanisme alors je vais dire ce que j'ai compris : On fait le PCR classique mais là on met ddNTP fluorescent du coup le PCR s'arrête puis recommence et genre il réplique et d'un coup au pif un ddNTP se rajoute puis fin de la PCR et après on sépare selon la taille sur électrophorèse puis pour finir on lit la fluorescence avec le cytomètre de flux ?
En faite je comprend pas comment si ce n'est pas fait de manière aléatoire comment on fait allonger allonger que de 1 nucléotide pour reprendre où on en était comme sur ce schéma :

Merci d'avance, Tom.

[Lilou Sanger]

Coucou Tom !
Alors on va reprendre mais globalement t’as tout compris ☺️

Alors la PCR servira à amplifier une séquence spécifique quand on ne l’a pas en quantité suffisante

Alors que le séquençage Sanger servira à lire l’enchaînement de nucleotides
Donc on va mettre la séquence d’ADN avec des dNTPs et des ddNTPs
Et les ddNTPs vont stopper la synthèse d’ADN, contrairement aux dNTPs
Donc la polymerase va insérer soit un dNTPs, soit un dNTPs
Comme on fait bcp de cycles on aura beaucoup de fragments de tailles différentes
Donc on va obtenir plein de fragments différents terminant par une des bases ( A T C G)
Ces bases sont radio marquées pour les reconnaître quand on fera migrer ces fragments

Donc à la fin on obtient les tailles des fragments ainsi que la nature du dernier nucleotide qui aura stopper la synthèse
Avec tout ça on peut reconstituer la séquence de nucleotides ☺️

Mais t’embête pas trop avec ça c’est plutot de l’UE11, c’est pas la partie la plus importante pour le S1☺️

C’est bon pour toi?😜

[Tom_vdlg]

C'est bon pour moi merci mon problème résidait surtout dans le fait que l'image et le texte me faisait avoir deux réflexions différentes l'images me donner une impression que cela se faisait de manière ordonnée et le texte me faisait penser à une méthode un peu aléatoire