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Séparation ADNc

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Séparation ADNc

Messagepar Tom_vdlg » 20 Avr 2020, 17:18

Salut,

J'ai vu ce post : https://www.carabinsnicois.fr/phpbb/vie ... 5&t=138864

mais du coup je me demande comment on obtient des colonies pures parce que on a notre culot de bactérie avec insert qu'on étale sur une boite de pétri pour former les colonies mais elles se séparent toutes seules en colonies pures ?
Je sais pas trop comment expliquer qu'est qui empêche les colonies de pousser comme ça (celle de couleur mixte au milieu) :

20200420_181519.jpg


Merci d'avance
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Re: Séparation ADNc

Messagepar AnNévrisme » 01 Mai 2020, 14:07

Coucou :)

Alors je t'ai fais des schémas en retour qui illustre ce que nous sommes censés avoir si "tout se passe bien"

NTB : j'ai dessiné ici 3 bactéries sur la boîte de pétri et dans les tubes mais il faut bien se rendre compte qu'en réalité les quantités sont beaucoup (beaucoup) plus importantes :) mais pour la santé des yeux de tous c'est mieux comme ça je pense

NTB 2 : les ronds bleus représentent un ADN Recombinant avec insert paternel et les verts maternels

Point super important +++ : il faut bien avoir en tête que ses schémas représentent les bactéries "en transparence" mais en labo on ne voit pas les bactéries sur le gel sans microscope et surtout on ne voit pas quel allèle elles ont intégrées ou non !
Par contre on utilise le fait que 1 bacterie= 1 allèle si la bactérie fait une colonies toutes les bactéries issues auront le même allèle
Donc une colonie = un allèle
Donc si on sépare maintenant physiquement les colonies en mettant des bactéries de
chaques colonies dans des tubes différents on a : un tube = bactéries d'une même colonie = un même type d'allèle (père ou mère)
Pour déterminer pour chaque tube si c'est père ou mère on devra extraire l'ADN Recombinant et le séquencer

IMG_20200501_145257.jpg


IMG_20200501_145222.jpg


Du coup le cas que tu as dessiné n'est pas censé arriver, ou en tout cas attendu si le protocole est respecté.
Si par ailleurs on ne sépare pas assez les bactéries lorsqu'on les mets sur boîte de petri, on pourrait avoir une colonie mixte avec des bactéries avec insert paternel et d'autre avec insert maternelle (et non pas une bactérie avec les deux inserts car pour rappel au moment de la transformation une bactérie intégre un insert) --> cette colonie hybride serait inexploitable sachant que si l'on repique à la pipette et qu'on met dans un tube PCR on aura à nouveau des allèles paternels et maternels dans le même tube.

J'ai répondu à ta question ? :)
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Re: Séparation ADNc

Messagepar Tom_vdlg » 02 Mai 2020, 16:49

Ouais c'est exactement ce qu'il me manquait je ne savais juste pas qu'on pouvais repiquer les bactéries une à une. Et donc qu'il suffit après de les étaler correctement pour avoir des colonies pures. Tout mon problème est résolu merci beaucoup pour tes schémas explicatifs
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