Annales 2012 QCM 8

[Anamniocentèse]

Re saluut

Cette fois je ne comprends pas l'item D pourquoi il est vrai?

QCM 8 : Vous réalisez le clonage du gène codant pour la béta-galactosidase dans le plasmide pBluescriptII qui contient un gène de résistance à l’ampicilline. Les ADN recombinants sont introduits dans les bactéries compétentes par choc thermique. On met ensuite les bactéries en culture sur boite de pétri contenant de l’ampicilline. Concernant les bactéries qui vont se développer, indiquez-la ou les réponse(s) exacte(s) :
A) Aucune bactérie ne se développe
B) Les bactéries contenant un plasmide avec insert se développent
C) Toutes les bactéries se développent
D) Les bactéries contenant un plasmide vide se développent
E) Les propositions A, B, C et D sont fausses

La correction dit seulement "cf. B" mais je ne comprends pas, si ceux qui ont l'insert ET ceux qui sont vides se développent alors pourquoi l'item C est faux et quel est l'intérêt d'avoir fait ça alors?

[JuLstine]

+ 1 je comprends pas non plus

[AnNévrisme]

Salut à vous deux !

Dans le cours on parle bien de plusieurs étape de vérification.

Pour récap :

Après avoir rendues nos bactéries compétentes on leur a imposé un choc thermique et on les a mis dans des tubes a essais en présence des ADN Recombinant qu'on vient d'assembler ---> une bactérie est censée intégrer un ADN Recombinant

Seulement dans les faits, à la fin de cette étape on peut se retrouver avec :

a) des bactéries n'ayant rien intégré

b) à l'étape d'insertion de l'insert dans le vecteur (plasmide ici), des vecteurs on pu se refermer sur eux même sans l'insert ---> des bactéries ont donc pu intégrer des vecteur sans insert

c) des bactéries qui ont intégré l'ADN Recombinant

On veut éliminer les cas a) et b) car seuls les c) nous intéressent et pour ça la prof nous décrit deux méthodes complémentaire (parmis d'autres qui existent en labo) :

pour éliminer le cas a) on se sert de la résistance à l'ampicilline car le vecteur possède un gène de résistance ---> si la bactérie à intégré le vecteur (plasmide) alors elle est résistante sinon elle meurt

---> cas a) éliminé mais il reste le cas b) étant donné qu'ils ont quand même intégré le plasmide (sans insert mais ce n'est pas l'insert qui porte le gène de résistance !)

pour éliminer le cas b) on se servira du fait que si l'insert est bien dans le Plasmide il coupe un gène du plasmide pBluescript en deux et donc l'inactive : le gène de la Beta galactosidase.
Quand ce gène est actif quand on met IPTG + Xgal dans le milieu la bactérie devient bleue sinon elle reste blanche.

-si la bactérie est bleue le gène est actif donc l'insert ne l'a pas coupe en deux : il n'y a donc pas d'insert
-si la bactérie est blanche le gène a été inactivé par l'insert : on a bien un insert dans le plasmide

---> c'est ce qu'on appelle la sélection blanc/bleu

Étant donné qu'on cherche à avoir que les bactéries ayant intégré un plasmide avec insert (ADN Recombinant) on va sélectionner les bactéries blanches.

----> le fait qu'elles aient résistées à l'antibio veut dire qu'elles ont intégré un plasmide + le fait qu'elles soient blanches ensuite veut dire que le plasmide qu'elles ont intégré comportait bien un insert (c'était donc un ADN Recombinant)

C'est ok pour vous ?

[JuLstine]

Ton explication est parfaite++ J'ai tout compris merci bcp

[Anamniocentèse]

Whaouh! Merci beaucoup pour ton explication, géniale!