quantité d'ADN génomique vs quantité de produit PCR

[Mew]

EDIT : Finalement j'ai compris, j'avais juste pas bien saisi le principe de la PCR de base...

Bonjour j'ai une question qui subsiste suite à l'explication (d'ailleurs très claire) de ce post : https://www.carabinsnicois.fr/phpbb/vie ... es#p644876

J'ai du mal à comprendre pourquoi quand on fait une PCR et qu'on mesure au bout du 40e cycle on a autant de produit PCR si on met très peu ou beaucoup d'ADN génomique. Genre justement si on en met peu on atteint un maximum qui est plus bas non ? Ou bien la plus petite quantité d'ADN génomique que l'on introduit (en l'occurence 0,0001microg) est telle qu'on arrive quand même au max de nos capacités de production ? Ou bien est-ce que nos produits génétiques sont "recyclés" c'est à dire réutilisés jusqu'à épuisement de la polymérise ou des dNTPs ? Je sais pas si ma question est claire..

Merci !

[Ann’ATP]

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[Elanine]

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[Lilou Sanger]

C’est bon pour tout le monde ou vous voulez qu’on re explique ?☺️

[Elanine]

Moi je veux bien une petite explication s’il te plait 😋

[AnNévrisme]

Coucou!

Du coup pour répondre à ta question : on met la même quantité de primers, de taq etc pour chaque PCR.
Ensuite on laisse les cycles se dérouler jusqu'à épuisement des constituants (plus de primers, taq épuisée...) Soit environ 40 cycles. Donc même si au bout de ces 40cycles les patients avec quantité d'ADN élévés initialement pourrait potentiellement encore continuer on arrête pour tout le monde.
A ce moment là étant donné qu'on à une multiplication exponentielle, que la quantité d'ADN initiale soit faible ou plus élevé l'exponentialité fait qu'à l'arrivée les quantité sont sensiblement les mêmes.
Cependant et c'est ça qu'il faut bien retenir ! On arrive au même résultat mais le temps pour y parvenir n'est pas le même !
Plus on a d'ADN initialement plus vite on parviendra au max de saturation de la PCR et inversement !
Et c'est sur ce point : le nombre de cycle qu'il faut pour que la fluorescence soit détectée = cycle seuil Ct qu'on détermine la quantité initiale --> moins il a fallu de cycle (cycle seuil faible) plus il y'avait d'ADN de base

Pour ceux pour qui ça reste vraiment flou:

C'est comme si on avait pour projet de faire 100 cookies. Tu as deux équipes qui ont chacune la même quantité d'ingrédients et le même four.
Seulement dans l'équipe A ils sont 2 cuisiniers dans la B ils sont 4
A la fin on aura 100 cookies dans les deux équipes mais l'équipe B sera allée plus vite, et aura fait déjà 10 cookies quand l'équipe A en sera à 4.
On regarde à partir de combien de minutes ils sont arrivés à une quantité pas mal de cookies (15) pour l'équipe B se temps sera plus faible que pour l'équipe A

Nb de cookies = quantité d'ADN
Les ingrédients = composants de la PCR
15 cookies = cycle seuil on détermine qu'on remarque qu'ils font des cookies qu'à partir de 15

C'est plus clair ?

[Elanine]

Géniale merci beaucoup j’ai tout compris ! 😇