pcr en temps réel / pcr classique

[Gabriellegabrielle84330]

Bonjour alors j'ai une question à propos de la phrase suivante :"Comme pour la PCR classique, on fait plusieurs cycles jusqu’à épuisement du matériel dans la pcr en temps réel"
Mais en fait j'arrive pas trop à comprendre cet item est pourquoi il est juste ?
Si vous pourriez me faire une explication ce serait le tooop

[AnNévrisme]

Coucou

En fait ça veut seulement dire que dans la PCR en temps réel (comme classique) on laisse les étapes se faire jusqu'à épuisement de la Taq (la 2ème phase de plateau dans la courbe de fluorescence --> environ 40 cycles).
On ne décide pas d'arrêter par exemple à 25 cycles car on se souvient que plus les échantillons ont une quantité d'ADN initiale minime plus le nombre de cycle qu'il faut pour obtenir un début de fluorescence remarquable est élevé!

Si on reprend le graphique (déso on voit pas très bien les chiffres sûr mon screen) si on arrête à 20cycles on aura pas encore atteint le cycle seuil de l'échantillon à 0,001ug et donc en ne sachant pas son cycle seuil on ne pourra pas déterminer la quantité initiale !

Retiens donc qu'on laisse la PCR se faire tranquille jusqu'à ce que le milieu réactionnel soit épuisé (plus de dNTPs, taq fatiguée etc...) : soit environ 40cycles
- pour la PCR en temps réel : afin que même l'échantillon avec une quantité infime d'ADN puisse un moment avoir une fluorescence détectable et donc qu'on puisse pouvoir quantifier, à partir du cycle seuil, l'ADN présent chez le patient (ex +++: la charge virale d'un patient)

-pour la PCR classique on a tout intérêt à faire un max de cycle car ici le but est d'obtenir pleins de copie du fragments et comme avec la PCR on obtient 2^n fragments avec n le nombre de cycle plus on fait de cycle plus on obtient de copies

C'est ok pour toi ?

[Gabriellegabrielle84330]

oui vraiment mercii pour l'explication hyper détaillée !