Types de coupures par endonucléases

[ANiSM]

Bonsoir !

Alors voilà : lorsqu'on va utiliser des endonucléases (pour couper un vecteur et permettre d'insérer l'insert par exemple), que va-t-on privilégier, une coupure à bouts francs ou une coupure à bouts cohésifs ?
En effet, dans le cours 3.1 sur les principes de biologie moléculaire il est dit que lorsque les endonucléases réalisent des coupures à bouts francs, celles-ci sont plus compliquées à recoller. Mais lorsqu'on parle dans un autre cours de l'utilisation de nucléases pour rendre les bouts cohésifs --> francs (si je ne dis pas de bêtise), je ne comprends pas qu'est-ce qui est le mieux.

J'espère avoir été clair

Mercii d'avance !

[Nucléodrey]

Hello,

Ca va dépendre on peut utiliser les deux, mais il faut se questionner sur ce qui est le plus adapté selon ta séquence.

Si on peut faire un bout cohésif ( même séquence aux extrémités des deux fragments que tu veux lier alors on privilégie le cohésif car plus facile pour la ligation.
Si on a deux extrémités différentes on privilégiera le franc si on peut, on alors le cohésif+ polymérase pour combler l'extrémité cohésive et la rendre franche.
Dans la configuration insert +plasmide, les extrémités sont souvent différentes donc plutôt franc mais si on conserve une cohésive et une franche on évite que le plasmide se referme sur lui même...à adapter à chaque cas.
J'espère que c'est plus clair
Bonne journée
Audrey

[ANiSM]

Bonjour, merci pour ta réponse c'est plus clair
Bonne journée