réplication / cytométrie de flux

[horselovexoxo<3]

coucouuu

à propos de cette expérience :

je ne comprends pas du tout comment on doit l'interpréter, de ce que j'ai compris le premier pic correspond à la phase G1 et le 2e à la phase G2, mais je ne comprend pas comment la cellule évolue, comment on arrive à comprendre qu'elle à un problème, qu'elle s'arrête à une phase, qu'elle ne reprend pas le cycle ou bien qu'elle meurt.

merci

[El Sangliero]

Salut Horselovexoxo<3 !
Alors on revient bientôt avec une réponse plus détaillée mais en attendant si tu veux pas attendre tu peux checker la diapo de l’expérience de la TTR du S1, j’avais utilisé cette image pour faire 2 QCMs, ça t’aidera peut être à comprendre ici dans diapo TTR le dernier qui s’appelle un truc comme « l’expérience PASS LAS

On revient bientôt pour plus d’amples explications !
Des bisous
La Biocell

[El Sangliero]

Salut Horselovexoxo<3 !

Donc on va revoir tout dans cette petite figure
Dans cette expérience, ils rendent fluorescent tout l'ADN dans la cellule, donc la fluorescence de la cellule est proportionnelle à la quantité d'ADN qu'elle contient ! Ensuite on va utilisé la cytométrie de flux pour sonder la quantité d'ADN et compter combien de cellules a chaque quantité d'ADN à chaque temps.
On a :
- en abscisse : quantité d'ADN
- en ordonnée : le temps
- en "3D" : la quantité de cellule avec la quantité d'ADN correspondant à l'abscisse et au temps T de l'ordonnée

La cellule RAD9 est une cellule sauvage, donc elle elle va vivre ce qu'une cellule normale va vivre :

dans le milieu normal
image en haut à gauche

On a comme tu l'as dit un premier pic qui correspond à G1, où on a n ADN (il y a pas encore eu la réplication),
Puis toutes les cellules vont toutes passer plus ou moins en réplication en même temps (mais elles ne sont pas parfaitement synchrones, ce qui fait que quand une poignée d'entre elles est à 1,5 ADN, d'autres sont à 1,3 ou 1,75 ADN, c'est pour ça que le "pic" réplication n'est pas un pic mais plutôt étalé, c'est ce qu'on observe à peu près à 30 minutes).
Finalement les cellules atteignent G2 et se posent avec 2n ADN, c'est là qu'on observe la deuxième pic.

dans le milieu exposé
image en bas à gauche

Ici, on va mettre un agent alkylant qui bloque la fourche de réplication, donc qui normalement bloque la réplication, dans le milieu de nos cellules.
Nos cellules ont leur premier "pic" en G1
Elles sont censée passer rapidement la réplication et on est censé observer un "plateau", mais à la place, cette réplication est beaucoup plus longue et on observe une progression comme une "avancée de pic", ça veut dire que les cellules sont ralenties pendant leur phase de réplication, mais elles continuent tout de même à progresser dans le cycle,
si la cellule s'était arrêtée, sans pouvoir finir la réplication, on aurait pu déduire que le dommage avait été repéré par un check-point qui avait dit "eh les gars va falloir réparer la couille la avant de continuer sinon on est dans la merde", la cellule se serait donc arrêtée le temps de se réparer, MAIS le système de raparration défaillant ne serait pas venu réparer
--> Si arrêt du cycle, checkpoint fonctionnel et système de réparation défaillant
Si la cellule n'avait pas du tout été ralentie, bien qu'on ait induit en elle des mutation, ça veut dire qu'elle n'a pas pris le temps de réparer, mais en même temps elle ne s'est pas arrêtée, ce qui est du à un problème dans le checkpoint ! Si on repère pas le problème et qu'on appelle pas à l'aide les réparateur, on ne peut pas réparer !
--> Si mutation, mais persistance d'un cycle "normal", système de réparation surement fonctionnel juste non collicité et checkpoint défaillant !


La cellule rad9 est une cellule mutée pour ce gène, donc :

dans le milieu normal
image en haut à droite

La cellule ne subit aucune mutation et réagit donc tout à fait comme la normale

dans le milieu exposé
image en bas à droite

La cellule a cette fois subit une exposition à un agent alkylant et devrait donc réagir comme la cellule précédente si elle était saine
Cependant il n'y a pas de ralentissement du cycle et la cellule continue sa réplication comme si aucune couille dans le potage il y avait !
C'est le cas qu'on a vu plus haut, notifié d'un petit ! La cellule a peut être un système de réparation fonctionnel, mais son check-point est défaillant et ne pourra pas détecter lle problème !

La mutation de RAD9 entraine une défaillance du checkpoint, donc RAD9 code pour une protéine nécessaire à ce checkpoint !

Pour ce qui est de la mort cellulaire, quand les cellules entre en apoptose elles vont se fragmenter en corps apoptotique emportant un peu d'ADN dans chaque corps. Donc la machine repèrera comme plein de mini-cellules qui ont moins d'ADN que les cellules même en G1, ça formera un pic sub-G1 en cytométrie de flux !

Voilou ! C'est long et un peu brouillon mais j'espère que ça répond à ta question, sinon n'hésite pas à me le dire !
Bonne journée !

[horselovexoxo<3]

waaaaa mais non elle est super ton explication merci bcp j'ai bcp bcp bcp mieux compris !!!!!!

-> et juste du coup par rapport à la cytométrie en bas à droite où on a l'agent alkylant et la mutation pour rad 9. Du coup on ne détecte pas le problème parce qu'il n'y a pas d'activation du checkpoint, donc les cellules sont censées mourir c'est ça?? on peut le voir sur cette figure là ou pas ? (c'est le pic subG1 dont tu parlais ?)

merci bcp en tout cas d'avoir pris le temps de m'expliquer et d'avoir fais un si long paragraphe !! (et non tkt c'était pas brouillon du tout )

[El Sangliero]

Salut !

Alors non ici la cellule va continuer à faire son cycle comme si de rien n’était vu que le check point ne fonctionne pas donc elle va pas mourir directement (vu qu’elle s’aperçoit pas qu’elle a un problème) donc dur cette figure là on ne voit rien qui nous indique que la cellule meurt.
C’était en règle générale que je disais qu’on peut voir un pic sub G1 si il y a une apoptose, mais là on ne l’observe pas !

Bonne journée !

PS : Je suis contente d’avoir pu t’aider

[horselovexoxo<3]

reee

okay d'accord je vois, mais du coup on est d'accord que au bout d'un moment (je crois c'est dis dans le cours) qu'elle va avoir tellement de mutation qu'elle va mourir parce que comme elle s'en étais pas aperçue bah c'est vreuuument la cata.

donc la je suis d'accord qu'on le voit pas, mais si on avait continué l'expérience un peu plus longtemps, tu penses qu'on aurait put voir ce pic ? (c'est pour essayer de comprendre le jour j, si on a une expérience comme ça et qu'il faut interpréter si la cellule meurt ou pas )

merciiii

[El Sangliero]

Oui oui, bien sûr au bout d'un moment on va avoir beaucoup trop de couilles dans le potage, la cellule accumule beaucoup trop de dommages à l'ADN et c'est le décès !
Donc si on avait continué suffisamment longtemps l'expérience on aurait sans doute pu observer ce pic à mon avis !

[horselovexoxo<3]

ok c'est carré merci pour tout