PCR Thermofischer

[Omicron]

Salut

J’ai un peu de mal avec la PCR clonale chez Thermofischer.

1) Un 1er primer s’hybride à la séquence P1 et on forme le brin complémentaire du brin de départ
2) Un 2ème primer biotynilé s’hybride en 5’ et on forme un brin de même séquence que le brin de départ

Mais ensuite, on nous dit: « Lors du second cycle, le fait d’avoir synthétisé ce brin complémentaire va permettre à ce nouveau brin de pouvoir ce fixer toujours par complémentarité des bases sur le primer localisé sur une petite sphère magnétique »

Le brin d’ADN s’hydride-t-il lors du second cycle ou après celui-ci ?
Les brins sur la sphère métallique sont-ils simple ou double brin ?

Je ne sais pas si ma question est très claire … J’espère que vous comprendrez

Merci d’avance
Bonne journée

[Stabilo'drey]

Coucouuu !

Alors je te met ces schémas qui étaient présent dans ma fiche de la tut rentrée :

NGS 1.png (7.14 Kio) Vu 245 fois

NGS 2.png (9.26 Kio) Vu 245 fois

NGS 3.png (9.95 Kio) Vu 245 fois

Tu peux voir que tu as bien 2 cycle PCR avec 2 élongation, et c'est APRÈS la fin de la 2e élongation que la séquence en rouge peut venir se fixer par complémentarité des bases aux séquences présentes sur la sphère métallique.

Au début la sphère métalliques est remplis uniquement d'amorces, puis les fragments d'ADN s'y ajoutent par complémentarité des bases, on va avec encore une élongation directement sur la sphère nous donnant des sphères avec des ADN double brins. Et enfin pour réaliser le séquençage, on dénature nos brins pour qu'il puisse y avoir uniquement des brins d'ADN simples brins accrochés à la sphères magnétique.

Est ce que ça répond à ta question ?

[Omicron]

Coucou

Merci beaucoup, ton explication est super claire

Bonne journée