eclaircissements

[Rox et Rouky]

coucou ! j'ai du mal avec NGS est ce que c'est possible de me dire si j'ai compris please :
- les puits sont contenu dans une puce, la puce est l'ensemble si j'ai bien compris
-1 microréacteur on a seulement 1 seul brin d’ADN qui sera amplifier
-les microreacteurs c'est pour la 1ere et 2e elongation avant d'etre mis dans la sphere ?
-le séquençage est réalisé dans la sphère métallique

[Stabilo'drey]

Hello !

Alors dans l'ensemble c'est ça, mais c'est un peu dans le désordre.

On commence par mettre tous nos "ingrédients" dans un microréacteur. Donc dedans on aura :
1 brin unique d'ADN à séquencer
Une sphère métallique encore vide (sans ADN)
Tous nos outils pour faire les cycles PCR (amorces, nucléotides, ADN polymérase...)

Dans ce microréacteur se produit la PCR clonale où les brins d'ADN vont être amplifié puis venir se fixer sur la sphère métallique. C'est à ce moment là que y'a l'histoire des 2 cycles PCR avant que les brins d'ADN puissent se fixer par complémentarité à la sphère métallique. Une fois fixer par complémentarité, il y a une élongation directement sur la sphère métallique, pour que nos séquences d'ADN soit ancrée sur la sphère.

Une fois la PCR clonale terminée, on dénature tous nos brins pour obtenir une sphère métallique remplis de fragment d'ADN simple brin TOUS IDENTIQUES.

On sort les sphères des microrécateurs pour réaliser le séquençage. On vient placer les sphères dans des petits puits eux même contenue dans une puce. En gros t'as une grande puce avec pleins de petits trous qui sont tes puits, et dans chaque puit se trouve une sphère métallique. C'est dans ces puits que se déroule le séquençage. Donc le séquençage n'est pas réalisé dans la sphère métallique, c'est plutôt que les nucléotides vont venir s'ajouter aux séquences d'ADN qui sont présentes sur les sphères métalliques.

Est ce que ce récap est plus clair pour toi ?

[Rox et Rouky]

top ton explication c'est super merci !