Coucou !
Tu n'as peut-être pas bien saisi la raison pour laquelle on réalise un clonage moléculaire.
Je te met un post ici qui explique le but du clonage moléculaire :
https://www.carabinsnicois.fr/phpbb/vie ... 7&t=161787Le clonage te sers juste à
séparer les séquences d'ADN pour pouvoir séquencer les 2 allèles séparément. Sans clonage moléculaire on est obligé de faire le séquençage de nos 2 allèles ensemble. C'est utile quand notre séquence est
illisible. Mais ce n'est pas vraiment
un moyen de diagnostic comme le Séquençage Sanger, la PCR RFLP ou la NGS.
En effet dans le cas de variants d'épissage on a souvent besoin de réaliser un
clonage moléculaire quand la mutation est hétérozygote parce qu'on a
l'ajout ou le retrait d'une partie de la séquence d'ARNm ce qui décalle tout. Mais le clonage moléculaire aurai aussi été nécessaire dans le cas d'une mutation par
additionou délétion autre qu'un variant d'épissage.Ce que tu dois retenir pour les variants d'épissage : ce sont des mutations qui crée une
modification de l'épissage de l'ARNm, et donc change la protéine. Mais ce sont des mutations que tu retrouve sur les
introns et donc si tu réaliser une PCR + Séquençage sanger uniquement sur les exons
tu ne verra pas la mutation. Le moyen de comprendre exactement ce qui cloche, c'est de lire la séquence
d'ARNm mature car c'est ce brin qui va être utiliser pour la traduction. S'il y a un soucis sur l'ARNm on aura un soucis sur la
protéine. MAIS on ne peut pas séquencer d'ARN donc on doit passer par une étape où l'on copie l'ARNm en
ADNc pour faire correctement le séquençage.
ET dans un second temps, si au moment de la lecture de l'ADNc, on se rends compte que
les séquences se superposent, alors seulement là on fera un
clonage moléculaire. Mais ce n'est pas notre premier moyen pour faire le diagnostic.
Donc si tu as une suspicion de variant dépistage : on effectue une PCR + séquençage Sanger sur l'ADNc correspondant à l'ARNm du patientMaintenant je peux passer à la correction détaillée :
ITEM A FAUX : item WTF on utilise pas du tout la PCR quantitative pour ça
ITEM B FAUX : on ne peux pas séquencer de l'ARN mais que de l'ADN
ITEM C VRAI : pour ce que je t'ai dit au dessus
ITEM D FAUX : de 1 on ne peut pas faire de PCR sur de l'ARN et de 2 la PCR RFLP n'est pas une méthode que l'on peut utiliser dans le cas d'un variant d'épissage
Et voila ! J'espère que maintenant c'est plus clair pour toi !
Bon courage pour la fin du semestre