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bouts francs, cohésifs


bouts francs, cohésifs

Messagepar Nicolassitude » 25 Sep 2022, 09:55

Coucou la Génétique :in-love:

Je n'ai pas bien saisi le concept pk l'insert à bout franc ne peut pas être intégré directement à la plasmide ? Il faut obligatoirement que ce soit des bouts cohésifs pour que la ligase colle et que le plasmide soit fonctionnel ? La déphosphorylation des bouts francs sert à avoir des bouts cohésifs, à quoi sert les bouts francs si les + utilisés sont à bouts cohésifs.

Voila tant de questionnement pour ma part :eyeroll:
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Re: bouts francs, cohésifs

Messagepar Robisome » 30 Sep 2022, 09:38

Coucou à toi jeune généticien en herbe :D

Alors, j'essaie d'expliquer de façon simple :
Tout d'abord il faut savoir que la ligature insert + vecteur se fait par la ligase - donc ce n'est pas une étape spontanée.
Alors que l'hybridation des bases par complémentarité est une étape spontanée ++

tu comprends que si on a des extremités cohésives, la 1ere étape se fait toute seule, la ligase intervient que pour lier par liaison phosphodiester le vecteur et l'insert dans chaque brin.
Schermata 2022-09-30 alle 10.26.46.png


Dans le cas d'extremités franches, on a pas la première étape entre les bases complémentaires..
Schermata 2022-09-30 alle 10.28.24.png

Alors le vecteur il peut se renfermer sur lui-même sans intégrer l'insert - c'est pour éviter cela qu'on passe d'abord à la déphosphorylation.
comme tu vois dans l'image on enlève le P en 5' du vecteur pour qu'il puisse pas se renfermer.. (OH - OH ça ne marche pas)
Il pourra ainsi se renfermer qu'en présence du P de l'insert et de la ligase of course.

Pourquoi on crée encore des bouts francs alors s'ils sont chiants ? Bonne question : je pense la réponse est que des fois on a besoin de certaines séquences de nucléotides spécifiques et qu'on peut utiliser que certains types d'enzymes et en plus il faut qu'elles soient compatibles avec le vecteur.. donc la réalité contraint des fois à des choix moins optimaux, alors on rattrape comme on peut avec la déphosphorylation et/ou les stratégies de clonage comme la nucléase S1 ou le Klenow...

Est-ce que j'ai répondu à ta question ? :angel:
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Re: bouts francs, cohésifs

Messagepar Nicolassitude » 02 Oct 2022, 20:03

Merciii, j'ai bien tout compris pour perfect la génétique :glasses-cool:
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