Génétique - PCR en temps réel - SYBR Green

[AroNévrisme]

Bonjouur

Dans le cours, on dit que le SYBR green devient fluorescent lorsqu'il est fixé à de l'ADN double brin (cf. définition donnée du SYBR). Mais, juste au-dessus, il y a écrit que celui-ci devient fluorescent au moment de l'hybridation, lorsqu'il s'intercale.

Cependant, si je ne dis pas de bêtise, notre brin d'ADN lors de l'hybridation est un simple brin, non pas un double. Mais on voit dans le schéma juste en dessous qu'il y a bien une fluorescence à certains endroits. Est-ce que celle-ci serait dû à la présence des amorces, les Primers. En s'intercalant entre l'amorce et le brin d'ADN, c'est un petit comme si il y avait présence d'un double brin localisé, ce qui fait que SYBR Green devient en partie fluorescent lors de l'hybridation et totalement une fois l'élongation finie ?

Merci d'avance

[Paulysosome]

SALUT cher apprenti généticien

Alors effectivement le SYBER Green émet une fluorescence lorsqu'il est fixé à de l'ADN DOUBLE BRIN. (il s'intercale entre les deux brins).

Dans le cours on parle d'hybridation des AMORCES (p10)

Lors de l’hybridation des amorces, on a un refroidissement. A ce moment-là, le SYBR
green s’intercale dans l’ADN et devient fluorescent.

Lorsque l'amorce s'hybride avec l'ADN on a la formation d'un complexe avec deux brins.

-Un brin d'ADN
-Et un autre brin avec l'amorce (et un début d'ADN qui va se former lors de l'élongation).

Ainsi sur le schéma, la fluorescence visible lors de l'hybridation est située seulement au niveau des amorces.

Les molécules de SYBER Green se faufilent lors de cette étape entre l'amorce et l'ADN et deviennent fluorescentes.

Ensuite lors de l'élongation, de nouvelles molécules de SYBER Green viendront s'intercaler entre les brins (augmentant ainsi l'émission totale de fluorescence).

J'espère que ce point est devenu beaucoup plus fluorescent pour toi !!

Bonne soirée