HIBRIDATION DES PRIMERS THERMOFISHER

[Clémendocyte]

BONSOIR,

je n'arrive pas bine à comprendre cette étape notamment la seconde partie ou la 2eme PRIMERS est biothinilé en 5' ( je pense que c'eest tout simple mais bon ...)

Merci d'avance pour l'explication

[Paulysosome]

Coucouuuuuuuuuuuuuuuuu

Lors de la préparation des librairies on ajoute au fragment d'ADN une séquence P1 et une séquence A.

L'amorce va venir se coller à la séquence P1 (comme toi!! ).


-------------------________________________----------------

L'ADN polymérase va ensuite synthétiser le brin inverse.
5'-------------________________________----------------3'
<---
3'<______________________----------------5'O


On a donc un nouveau brin synthétisé dans le sens 3' 5' du brin initial.
Ce nouveau brin dispose d'une amorce biotynilée en 5' (O) et un primer en 3' qui est le reverse de celui fixé sur la sphère.

Ainsi suite à un lavage (qui enlève le brin initial) on peut ajouter le brin synthétisé à la sphère.

A ce moment-là l'ADN polymérase resynthétisera un nouveau brin à partir du brin synthétisé, et qui correspondra au brin initial.

J'espère que tu as compris, cette partie n'est pas évidente entre le brin initial, les rerveres, les reverses des reverses ....

Courage, des poutoux biotynilés