Methode chip on chip help :)

[Mathieu06]

En ce qui concerne la technique de l'immunoprécipitation de la chromatine, l'objectif etant de déterminer la quantité de nucléosomes possedant une modification particulière, pourquoi s'embete-t-on, apres la reversion du pontage, à purifier l'ADN et pas directement les nucléosomes ? puisque cette quantité d'adn ( du fragment pcr ou de la réaction totale ) nous renseigne sur la quantité de nucléosome ..

En gros, j'ai l'impression qu'on passe par une etape intermediaire inutile ...

[Margaux]

Non, l'objectif c'est de savoir si le promoteur d'un gène particulier est enrichi d'histones comportant certaines modifications post-traductionnelles.
Par ex.: on veut voir si le promoteur d'un gène (qu'on sait transcrit dans ce type de cellule) comporte beaucoup d'histones acétylées. Si oui, le résultat suggère une hypothèse: "L'acétylation des histones favorise la transcription du gène".
Et en répétant cette expérience avec des gènes transcrits ou non et différents types de modifications post-traductionnelles (acétylations, désacétylations, méthylations de H3 sur la lysine 4 ou 9, etc.), on peut déchiffrer le code des histones.

Donc ici, on sélectionne les fragments d'ADN qui comporte la modification post-traductionnelle des histones qui nous intéresse (acétylation).
On réverse le pontage pour avoir accès à l'ADN.
En réalisant un PCR (permettant l'amplification de la quantité d'ADN), on voit si le promoteur du gène concerné est oui ou non présent dans l'immunoprécipitat et s'il est beaucoup enrichi en histones acétylées.