Introduction vecteur ds c hote

[Caesar]

Salut
Alors je viens de me poser une ptite quest comment peut on savoir qu il n y a qu un seul ADN recombinant qui entre dans une bacterie une fois le choc thermique realise car en theorie la bacterie devrait un peu devenir une passoire et laisser rentrer n importe quoi non ?
Voila
Merci d avance

[Dawn]

Salut !

-Tu demandes si plusieurs ADN recombinant peuvent rentrer dans une même cellule hôte ?
-Ou si avec notre ADN recombinant d'autres choses peuvent pénétrer la cellule hôte ?

déjà je peux quand même te dire ce que je pense : le milieu dans lequel on plonge les ADN recombinants et les cellules hôtes doit être très "propre" --> donc si quelque chose entre dans la cellule hôte ça ne peut être qu'un ADN recombinant.
Et d'après les schémas de la prof, plusieurs ADN recom. peuvent pénétrer une cellule hôte (2 --> après je pense pas quils puissent y en avoir trop car la cellule hôte c'est pas énorme ^^), et toujours d'apres les schémas ce sont les 2 mêmes ^^ --> si effectivement 2 ADN peuvent rentrer dans la même cellules et s'ils sont différents, je ne pense pas que ça pose problème:
- si c'est un vecteur tout seul + un ADN recombinant avec l'alléle A ou B --> si technique du bleu et du blanc : on supprimera cette colonie (car elle apparaîtra bleue)
-si tu as les deux ADN recombinant différent, l'un avec l'allèle A et l'autre le B --> avec la technique bleu/blanc tu sélectionnera cette colonie mais au moment du séquençage, tu séquenceras quand même les 2 séquences séparément (enfin je crois ...)

Voilou, je ne sais pas si ça t'aide ...

[Caesar]

Hey salut Dawn
En fait moi c etait les deux adn dans la meme cellule hote car ce qui m a interpelle c est page 20 de la roneo: "Ceci permet aux ADN recombinants de rentrer dans les bacteries ( un par bacterie!)" en bas de page ^^
Donc voila je me suis dis tiens c est vrai pourquoi quand on etudie les bacteries y a tjrs qu un ADN recombinant par bacterie alors que pdt le choc en theorie il devrait y avoir de nombreux pores d ou un ptit nombre d ADN recombinants qui viendraient au chaud dans la bacterie (genre 3-4 deja c est pas mal quoi)
Or si on en a plusieurs le sequencage ne devrait pas etre top non car pour les selectionner toutes les techniques ne marchent plus car si 3-4 adn rec statistiquement ils sont pas tous identiques.
Et apres je me suis dit que c etait vrai que sur bcp de diapo y en a qu un par bacterie donc il doit y avoir, je pense, une technique pour limitter l entree (genre un peu un videur a l entree de la bacterie^^)
Voila er desole pour le pave
EDIT: en fait tes paves sont plus gros que les miens

[Dawn]

Oui oui nan j'ai dis du caca --> le sequençage sera effectivement pas top avec les superpositions et tout.

Je pense que dans la majeure partie du temps, un seul ADN rec rentre dans la cellule, après:
-si plusieurs rentrent et sont le avec le même allèle --> ça revient au même, on s'en rend même pas compte
-s'ils en rentrent plusieurs avec les allèles différents ça ne sera tout simplement pas concluant (le séquençage ne donnera rien de lisible, ça sera inexploitable) et on prendra une autre colonie pour en extraire les ADN rec et faire tout le schimblik

Pour ce qui est du videur ne sait absolument pas s'il existe ... Désolée mais comme je disais je pense que la cellule ne peut pas en accueillir trop.

[Caesar]

A mon avis la clef du pb c est justement le videur.
Donc si un biologiste moleculaire passe par la
Sinon merci de tes reponses Dawn

[gabriel]

coucou
alors pour repondre a ta question revenons au commencement:
-d'abord on insere un morceau d'ADN recombinant dans un vecteur (un plasmide): en general un seul morceau est inserer vu qu'on a utilisé la meme enzyme de digestion et on a donc generer un fragment d'ADN dont le bords sont complémentaires en sequence avec ceux du vecteur (et vu qu'on a pris les dispositions necessaires pour que le vecteur ne se referme pas sans ADN)
-donc jusque la nous avons générer des plasmides recombinants (on peut verifier grace au sequencage a cette etape qu'on a bien un vecteur transformé avec l'ADN souhaité)
-on peut donc passer à l'étape d'insertion du plasmide contenant le morceau d'ADN recombinant dans la cellule hote, qui est le plus souvent une bactérie: ces bacteries sont rendues compétentes grace a un choc thermique pour pouvoir integrer le plasmide recombinant. En general vu la taille des bacteries et des plasmides si on a de la chance on integre un plasmide ou aucun mais c'est rare voir pas possible d'en integrer plusieurs. Donc si tout marche on a integré un plamide contenant le morceau d'ADN souhaité. Apres selon les types de plasmides etc on a des moyens de selection de colonies de bacteries qui ont integré le plasmide (gene de resitance aux antiobiotiques etc.)
voila j'espere que ça reponde a ta question

[Caesar]

Salut
Alors oui si la taille et le seul element limitant l entree des adn recombinants dans la bacterie ou du moins que c est le principal, ouais ca reponds bien a ma quest
Donc merci bcp
Ps Dawn t avais bien raison sur ce point

[Dawn]

Sinon merci de tes reponses Dawn

De rien

Ps Dawn t avais bien raison sur ce point

On l'a trouvé notre videur !

[gabriel]

c cool cette entraide entre p1!!merci;)

[Dawn]

c cool cette entraide entre p1!!merci;)

Je trouve aussi ça écrabouille pleins de clichés sur la P1 !
Et merci pour ta réponse

[Caesar]

Je pense qu on doit etre la seule promo de P1 de France a en profite ou du moins faire partis de tres rares privilegies

[gabriel]

De rien