Clonage et migration éléctrophorétique

[Cécie]

BONJOOOOUR

Je suis dans le flou pour certaines petites choses:
Voici en gros ce que j'ai compris, est-ce que c'est juste ou je me trompe?

PCR: permet d'amplifier une séquence = (c'est a dire) permet composer un morceau du gène qu'on ne connais pas forcément, entre deux bouts de séquence que l'on connait.
Permet aussi de passer d'un ADN simple brin a un double brin???

Séquencage = pour la lecture des nucléotides d'une séquence?

Clonage moléculaire : pour séparer deux populations d'allèles qui s'interposent lors du séquençage.
Mais c'est la que je suis le + dans le flou car en fait je ne vois pas très bien a quoi correspond un allèle dans le concret, enfin je suis pas très claire, mais vu qu'on part d'un ADN simple brin, a quoi correspondent les deux populations?
je vois qu'un gène = introns + exons = codons = nucléotides... ? mais je ne vois pas ce que c'est les allèles... comment est-ce qu'ils font pour s'interposer?
Je comprend bien la logique de toutes les étapes du clonage, mais au final je ne vois pas qu'est ce que ca a changer de cloner. Enfin, je suis censée comprendre qu'on sépare deux population mais je vois pas en quoi on les sépare... est-il possible d'avoir un petit topo la dessus?



Aussi, dans la ronéo on précise que lorsque l'on travail sur les protéines, la migration se fait verticalement, mais n'est-ce pas le cas de toutes les migrations electrophorétiques (ADN, ARN...)?


MERCI BEAUCOUP EN TOUT CAS A CHAS QUI A FAIT UNE SUPERBE RONEO TRES LISIBLE ET AGREABLE AVEC UN COURS PAREIL

[Caesar]

Aussi, dans la ronéo on précise que lorsque l'on travail sur les protéines, la migration se fait verticalement, mais n'est-ce pas le cas de toutes les migrations electrophorétiques (ADN, ARN...)?

Salut cecilia
Alors la je peux te repondre avec certitude car j en ai deja fait une et elles peuvent se faire soit verticalement soit horizontalement
Voila bonne fin d aprem

Electro horizontale

Electro verticale

220px-Gelelektrophoreseapparatur.jpg (17.78 Kio) Vu 1173 fois

[gabriel]

alors:
-la PCR en principe permet d'amplifier une region spécifique du génome : pour cela on utilise des primers spécifiques de certains genes; donc en principe cette technique est surtout pour amplifier des regions qu'on connait (mais c'est vrai que les primers peuvent s'hybrider ailleurs et amplifier autre chose mais en principe si on choisit bien nos primers et s'ils sont bien spécifiques ça devrait amplifier que ce que l'on souhaite)
-une des étapes de la PCR est de synthétiser(grace a la taq polymerase) un brin complémentaire a partir d'un des brin de l'ADN double brin initial qui a été denaturé: c'est le principe de la PCR, a partir des 2 brins on en aura 4 etc.

-le séquencage est une technique qui sert à decoder une séquence inconnue en général: savoir quel est la séquence de nucléotides d'une region du genome

-un allèle c'est une version d'un gène qui se situe sur un chromosome: dans les gamètes qui sont haploïdes, un seul allèle est présent puisque au cours de la méiose il y a eu séparation des deux allèles portés par les deux chromosomes homologues.

-le clonage ça sert avant tout a obtenir un grand nombre de copies identiques absolument pures d'une séquence donnée d'ADN, ca va nous permettre par exemple de faire produire à une bacterie certaines proteines ou tranformer des plantes par transfection etc.
-ah oui je comprends de quoi tu parles quand tu dis séparer 2 populations; en fait les allèles sont les versions differentes d'un meme gène, donc par exemple l'allèle normal ou Wild type (wt) et celui muté; grace au clonage d'expression (qui est une autre utilité du clonage) on va donc seprarer ces 2 populations d'alleles puisque l'on integre qu'une sequence spécifique d'ADN grace aux enzymes de restriction qui ne vont couper par exemple que l'allele wt mais pas le muté

voila j'espere que c clair!
bizz

[gabriel]

ah oui et pour les migrations electrophorétiques en effet on retrouve les 2 vas de figures meme si les horizontales sont plus fréquentes pour ADN et ARN et verticales pour prot

[piccola]

Merci pour cette explication, c'est plus clair pour moi qui n'avais pas tt bien saisi non plus.

Bonne journée

[gabriel]

De rien!!bizz

[Shawn Jones]

.

[gabriel]

ben si l'individu est heterozygote il aura les 2 alleles wt et muté

[Shawn Jones]

ah oui putain. excuse. en fait c'est tellement honteux que je vais effacer mon premier post

[gabriel]

:p

[Cécie]

Merci beaucoup mais je vais faire la relou :p :
Ce que je comprend pas c'est qu'on a un ADN simple brin que l'on amplifie avec la PCR (donc on devrait pouvoir amplifier qu'1 allele?) et a la fin on se retrouve avec beaucoup beaucoup des deux allèles....

[gabriel]

Normalement grace aux enzymes de restriction on selectionne q1 allele.je ne comprends trop ta question;tu parles de clonage ou de pcr?

[Cécie]

Je parle de clonage mais il y a une étape d'amplification par pcr avant de cloner a propromement parler, non?
Si je comprend bien on va cloner dEux groupes isolement qui seront différent d'un allele a la fin ?

[gabriel]

Oui.si les alleles st bien differents lenzyme de restriction va couper q1 allele qui va etre inserer ds le vecteur et dc cloner et pour lamplification par pcr on utilise une amorce spe de cet allele pour etre sur de ne cloner que lallele dinteret

[Cécie]

ok d'accord
merci

[gabriel]

De rien!!

[christo]

Salut !
Dc si je comprends bien l'Enz de restriction coupe qu'un seul allèle pr l'insérer ds le vecteur !
Mais ds la ronéo à la page 20 pr les ARN messager ds la dernière phrase du paragraphe : " En effet si vs voulez cloner un ADN il faut avt tt le rendre double brin." ??

Cela veut dire que les Enz de restriction ne fonctionne que sur l'ADN double brin c ça ? ( dsl je m’emmêle un peu ^^ )

[gabriel]

les enzymes de restriction coupe une séquence spécifique d'un allele, soit donc sur de l'ADN double brin.c'est clair?

[christo]

OK c bn merci c'est ce que je pensé

[gabriel]

de rien:)