séquençage

[Shawn Jones]

Bonjour

Dans la Ronéo 1 p23 "4. vérification de l'insert par séquençage"

C'est juste pour être sur de ne pas m’être trompé:

1. On sépare un ADN double brin en 2 ADN simple brin
2. On synthétise un brin complémentaire a chacun des 2 ADN simples brins, dans le sens 5'-3' du brin (quand il marqué "synthèse complémentaire du brin 3'-5'", on parle du brin qui était dans le sens 3'-5' du double brin (avant la dénaturation), mais la synthèse du brin complémentaire se fait dans le sens 5'-3' de chaque simple brin, c'est ça? ) --> on fait cela pour vérifier qu'il n'y a pas d'erreur dans la séquençage
3. on décrypte la séquence par fluorescence ( méthode de Sanger )

Merci d'avance

[gabriel]

en gros c'est ça oui

[Shawn Jones]

ok merci beaucoup

[gabriel]

De rien

[Snoopy]

Bonjour !

Je profite de ce post pour demander une petite précision. Je ne comprend pas très bien comment on peut faire pour reconstituer la séquence d'ADN lors du séquençage : je m'explique.

On a séparé les 2 brins d'ADN, et les ddNTP arrête la synthèse, on fait une éléctrophorèse pour les ordonner en fonction de la taille et comme ils ont des fluochromes qui captent une certaine longueur d'onde on donne le nucléotides correspondant et du coup on aurait la séquence => OK

Le truc c'est que comme on a nos 2 brins d'ADN (on est d'accord qu'on a pas les mêmes nucléotides puisqu'ils sont complémentaires) :
- Le brin sens et le brin anti sens subiront le même sort
- On aura donc plusieurs fragments d'un côté appartenant à la reconstitution du brin sens et de l'autre appartenant à celui de l'anti sens

Donc la machine détectera à la fois les fragments de l'un et les fragments de l'autre, et je ne vois pas comment on peut dire que " ce nucléotide la correspond à la séquence du brin sens et l'autre à la séquence du brin anti sens " .... ?

Je sais que ma question n'est pas claire, mais c'est trop dur d'expliquer mon souci ^^
Merci d'avance a celui qui me comprendra et qui arriverait à m'expliquer ca

[gabriel]

lors de l'étape d'hybridation avec les amorces: celles ci se fixent sur une sequence complémentaire de l'un ou l'autre brin et l'elongation se fait sur cette amorce spécifique d'un brin et c'est grace à ça que l'on sait quel brin on detecte.j'espere que ça repond à ta question:)

[Snoopy]

lors de l'étape d'hybridation avec les amorces: celles ci se fixent sur une sequence complémentaire de l'un ou l'autre brin et l'elongation se fait sur cette amorce spécifique d'un brin et c'est grace à ça que l'on sait quel brin on detecte.j'espere que ça repond à ta question:)

ENORMEMENT merci, c'est peut être trop demandé pour les profs de faire des schémas clairs !

[gabriel]

On dirait!!lol!de rien!!