Concernant le clonage, il y a une partie dans la ronéo de l'année dernière p19 "les différents types d'insert"
On nous dit qu'on peut utiliser l'ARNm parce que parfois "la mutation ne touche pas directement la protéine, ce n'est pas une mutation par ex au niveau de l'exon mais au niveau par ex des sites de stress" je ne comprend pas bien cette phrase, bon à la limite c'est pas bien grave mais en fait je ne comprend pas quel est l’intérêt d'utiliser de l'ARNm à la place de l'ADN, dans quel cas (exemple ?) d'anomalie ou mutation on sera "obligé" de prendre des ARNm ?
D'autre part toujours dans cette partie, on nous parle du TA cloning, d'après ce que j'ai compris il s'agit de vecteurs "tout prêt" avec un "T sortant" qui va s'hybrider avec le "A en 3' " que rajoute systématiquement la Taq polymérase au produit PCR (donc à l'insert) ; ma question est est-ce que ça veut dire que l'étape d'enzyme de restriction ne sert plus a rien et qu'il suffit juste d'une petite ligation A-T pour avoir l'ADN recombinant ?
Dernière question désolée, je ne comprend pas bien le rôle de la carte de restriction (mais j'ai compris comment ça marche) à la fin du clonage (p22 dans 3. migration électrophorétique) on nous dit "qu'une fois l'ADN récupéré il faut déterminer la population à laquelle il appartient", mais comment peut on le savoir et séparer les allèles sains des mutés avec des enzymes de restriction etc vu qu'on ne connaît pas la mutation ? Est-ce que on se base sur un allèle sain "témoin", on regarde si ils sont digérés de la même façon, si oui c'est que ça faisait partie des bactéries ayant intégré l'allèle sain, si non c'est qu'on avait un allèle muté dans ce tube ?
Voilà merci beaucoup encore (par avance ^^)
Donc pour ce vecteur, tu connais les sites de coupures de toutes les enzymes de restriction qui peuvent le couper.
