Sonde taqman

[Nouni]

Bonjour Voila je suis désolée de demander ça mais j'aurais vraiment besoin d'une explication sur le fonctionnement de la sonde taqman.. J'ai beau relire le passage du cours ce n'est toujours pas clair merci d'avance

[Lady Vic]

Coucou

Dans cette technique, la sonde va s'hybrider au milieu de la région qui nous intéresse. Cette sonde (sonde Taq man) est constituée de 2 molécules :
- un rapporteur qui est fluorescent
- un quencher qui a la capacité d'inhiber la fluorescence du rapporteur quand ces 2 sont très proches l'un de l'autre

Donc quand ces 2 molécules sont hybridées à la sonde, le quencher va être à une distance du rapporteur assez petite pour pouvoir inhiber la fluorescence du rapporteur.

Par contre, la polymérase a une activité 5'-3' polymérase mais également une activité 5'-3' exonucléasique.
La polymérase va donc commencer à faire l'élongation du brin complémentaire et une fois arrivée au niveau de la sonde, la polymérase va être bloquée. Elle va devoir enlever la sonde pour qu'elle puisse continuer l'élongation du brin : il y a dégradation des nucléotides pour libérer la sonde.
-> le rapporteur et le quencher vont s'éloigner l'un de l'autre : le quencher ne sera plus assez proche du rapporteur pour inhiber sa fluorescence et il va donc y avoir émission de fluorescence.

Donc à la fin de l'élongation, un maximum de sonde Taq man va être dégradée et donc on aura un signal maximal. On est quantitatif !

Voili, voilou

J'espère que c'est + clair

Bonne soirée

[Nouni]

Oh d'accord merci c'est parfait!