FRET, spectres chevauchants ?

[Le Chat]

Hello !! Je trouve l'exemple hyper mal choisi page 8 :

Le signal CFP émet à 476 nm et le signal YFP est excité à 510 nm... Bon je suppose que les spectres se chevauchent tout de même (pas par leurs maximas respectifs m'enfin bon). Du coup même si la longueur d'onde du premier n'est pas exactement superposé à la longueur d'onde d'excitation du second, ça marche quand même... ? Si oui, j'espère qu'en expérience il nous fera tomber pas tomber des longueurs d'ondes à un intervalle de 50/60 nm ou la, on ne saurait pas trop si c'est assez ou pas éloigné pour avoir FRET ou non...

Merci d'avance !!

[PepL]

Bonjour !

En effet, en relisant cet exemple, je n'vais pas percuté mais c'est assez bizarrement choisi. On essaiera d'en toucher un mot au prof quand on le verra car je trouve cela étrange aussi. Pour le moment soyez "souples" avec les longueurs d'onde a quelques dizaines de nm près, mais on va essayer de lui demander une explication !

Bon courage !

[kinésine]

Coucou ! Je viens juste rajouter un petit quelque chose, je n'ai pas regardé si c'était dans la ronéo.

Le prof a bien dit en cours que les spectres pouvaient plus ou moins se chevaucher, que ça marchait quand même mais que la seule différence était au niveau de l'intensité:
Si les spectres ne se recouvrent pas beaucoup, l'intensité transmise (donc observée) sera plus faible
Pour significativement visualiser des protéines peu présentes dans le milieu c'est un peu compliqué, alors il faudra augmenter l'intensité du flux lumineux correspondant au spectre d'absorption du premier fluorochrome, c'est assez peu intéressant niveau rendement, mais ça fonctionne.
Une situation où ça peut être intéressant (ça c'est moi qui le dit pas le prof) ça doit être quand le FRET se fait majoritairement par rapport à la radiation seule du premier fluorochrome mais qu'on veut étudier les deux. Dans ce cas, une intensité pas trop forte peut être avantageuse pour distinguer les autres rayonnements, plus rares, mais à intensité maximale, du coup.

Bisous protéiques

[PepL]

Je ne l'ai pas vu dans la ronéo...
Mais merci beaucoup kinésine, en effet ceci explique cela !

[Le Chat]

Ok thanks. Bon ben logiquement si expérience il y a, il nous mettrait les graphes pour qu'on voit si ça se chevauche ne serait ce qu'un peu (et non juste les maximas, ou alors seulement si c'est grossièrement proche/éloigné) !

Merci à vous deux