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Immunofluorescence Indirecte


Immunofluorescence Indirecte

Messagepar Pinko Cerise » 05 Oct 2015, 17:07

Hello!! :D
J'avais des questions concernant le cours de méthode d'observation de la cellule, alors je voulais savoir si plusieurs antigènes pouvaient avoir des épitopes en communs...?
En fait je comprends pas l'interet d'avoir des anticorps monoclonaux si un anticorps ne peut reconnaître qu'un seul type d'antigène, les anticorps polyclonaux ne devraient reconnaître qu'un seul antigène non? 0_o :question:
A moins que les antigènes puissent posséder des épitopes en communs et à ce moment la on chercherait des épitopes propres à 1 seul antigène et du coup on pourrait "detecter" que lui? :confused:
Ah oui et du coup je comprends meme plus a quoi ca sert qu'on produise ces anticorps puisqu'on utilise des anticorps différents de la protéine étudiée...
Genre si on a une protéine humaine a étudier, on va insérer la protéine chez une souris pour obtenir des anticorps de souris anti protéine humaine, ensuite on va insérer ces anticorps de souris chez l'homme pour détecter la protéine et on va incerer des anticorps de cheval pour reconnaître les anticorps de souris...? (oulala dsl c'est meme pas clair pour moi :clap: )
Et les anticorps secondaires servent juste a amplifier le signal non..? Puisque les premiers sont deja fluorescents..?
Je crois que je m'embrouille completement la :weep: :sweat:
Dernière édition par Pinko Cerise le 06 Oct 2015, 11:45, édité 1 fois.
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Re: Immunofluorescence Indirecte

Messagepar cece » 05 Oct 2015, 18:45

Salut :)

Alors peut être que ce post peut t'aider à comprendre mieux l'intérêt des Ac monoclonaux :)
http://carabinsnicois.fr/phpbb/viewtopi ... pe#p402310

Ensuite les Ac primaires reconnaissent spécifiquement la protéine d'intérêt, et les Ac secondaires reconnaissent les Ac primaires.

Ce qui est super important, c'est que les Ac primaires et secondaires doivent obligatoirement provenir d'espèces différentes !!

Donc tu injectes ta protéine humaine dans une souris par exemple. La souris va crée des Ac contre cette protéine puisque pour elle c'est une protéine étrangère. ==> Là tu as les Ac primaires, spécifiques.

Ensuite, tu injectes ces Ac primaires (donc qui proviennent de la souris) dans une espèce encore différente, par exemple le cheval. Celui ci va produire des Ac dirigés contre les Ac primaires ==> tu obtiens donc des Ac secondaires

A ces Ac secondaires tu greffes des fluorochromes. Plus t'auras d'Ac secondaires, plus la fluorescence sera importante, donc plus le signal sera important :wink2:

Est ce que c'est plus clair ? Sinon n'hésite pas à nous redemander :)
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Re: Immunofluorescence Indirecte

Messagepar Pinko Cerise » 06 Oct 2015, 08:57

Coucou Céline! :D
j'ai deja mieux compris ces histoires d'épitopes mais je comprends tjr pas pourquoi on a besoin d'anticorps secondaires puisque ceux de la souris sont deja dirigés vers la protéine étudiée...pourquoi ne pas leur greffer le fluorochrome directement? :question:
on cherche bien a étudier la protéine de depart au moins...?
Dsl mais c'est toujours pas très clair pour moi :disapointed:
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Re: Immunofluorescence Indirecte

Messagepar cece » 06 Oct 2015, 10:37

Salut :)

On a besoin d'AC secondaires dirigés contre les AC primaires pour avoir plus de fluorescence et donc amplifier le signal.
Si tu greffais les fluorochromes sur les Ac primaires, tu en aurais pas assez puisque les Ac primaires reconnaissent juste l'épitope.

Anticorps.docx
(175.13 Kio) Téléchargé 31 fois


Je t'ai mis une image pour t'aider à comprendre :)
T'as les AC primaires en gris, et les secondaires en rose avec les fluorochromes en vert ;)

(Je te l'ai mis en version word parce que je suis pas très douée j'y arrivais pas autrement :disapointed: )

Est ce que c'est mieux ?

Bonne journée !
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Re: Immunofluorescence Indirecte

Messagepar Pinko Cerise » 06 Oct 2015, 11:44

merci pour ta réponse super rapide <3
C'est enfin compris!!! :victory:
Et merci pour ta patience :lool:
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