Biochimie

[Jade&yo]

Bonsoir ! Est-ce que quelqu’un aurait la gentillesse de m’expliquer ce qu’est la focalisation isoélectrique des peptides ? Mercii

[mariol]

Salut salut
Alors en gros, lorsque tu réalise une éléctrophorese ton but est de venir séparer des proteines/peptides. Tu va venir les séparer selon 2 critères:
1- Leurs charges
2- Leurs poids

1- Leurs charges:
La charge d'une protéine est caractérisé par son pHi= point isoéléctrique (valeur du pH pour laquelle elle est éléctriquement neutre).
Ducoup tu va venir mettre toute tes proteines sur un gel (gel1) et appliqué un champ électrique continu
les protéines vont migrer vers la zone de pH "en équilibre" avec leur pH isoélectrique
Ducoup tu va te retrouver avec des protéines rangé/ordonné selon leur pHi
La focalisation isoéléctrique c'est ca, c'est une méthode de séparation des protéines qui repose sur la distinction de ces macromolécules selon leur point isoélectrique.

Tu prends le gel 1 et tu le fais fusioner avec le gel 2 Comme ca grâce au gel1 on a creer des "colones" qui caracterisent un pHi, puis le gel2 va creer des "lignes" qui caracterisent la taille.
*

2-Leurs tailles:
Tu prends tes protéines (déja separer en colones selon leurs charges), tu appliques un champ électrique et de la, tes protéines vont migrer vers l'anode +
plus la protéine est légere plus elle ira loin
plus la proteine est lourde moins elle ira loin (imagine elle a un gros cul elle va plus galérer)

*Avant la deuxième séparation selon la taille, tu va venir dénaturé tes protéines chimiquement et thermodynamiquement avec du SDS. En gros le SDS va venir annulé toute les charges précédentes de la protéine avec des charges négatives, de telle sorte que toutes les protéines soit chargé négativement - et quelles migrent vers l'anode +

Voila j’espère que tu as compris! la le but c'est surtout de comprendre le principe (t’embêtes pas à apprendre toute les noms des gels/matériaux..) et de bien retenir la partie en rose sur la taille des protéines selon leur distance de migration ++

Bon courage

[Jade&yo]

Super merci beaucoup, j’ai tout compris !