Annatut 2019 Digestion enzymatique QCM3

[lorieb]

Bonjour,

Voici le QCM sur lequel je me pose une question:

QCM 3 : Vous suspectez la présence de la mutation c.323A>G du gène XYZ dans une famille. La séquence
nucléotidique qui encadre cette mutation sur un allèle muté est la suivante (position 323 soulignée) :
ACGTTGGAGTTAAACG
Vous voulez réaliser une PCR qui encadre cette mutation, suivie d’une digestion enzymatique, pour la rechercher.
Vous disposez des enzymes de restriction suivantes :
EcoR I, site de restriction : GTTGGA
BamH I, site de restriction : GGACTT
Hpa I, site de restriction : GGAATT
Sma I, site de restriction : GTTAAA
Quelle(s) enzyme(s) de restriction sera(ont) informative(s) pour détecter l’absence de la mutation ?
Indiquez-la ou les réponse(s) exacte(s) :
A) Sma I et Hpa I
B) Hpa I uniquement
C) Sma I uniquement
D) BamH I uniquement
E) Les propositions A, B, C et D sont fausses

La correction est A. Or, si Sma1 et Hpa1 ensemble permettent de détecter l'absence de mutation, je n'arrive pas à comprendre pourquoi ils ne la détecteraient pas non plus séparément, et donc pourquoi les réponses B et C ne sont pas comptées comme juste... Pouvez vous m'expliquer ?

Merci d'avance

[AnNévrisme]

Salut

Alors sache qu'on ne t'as pas oublié(e), la seule chose qui me pose question est la formulation de la question :

Quelle(s) enzyme(s) de restriction sera(ont) informative(s) pour détecter l’absence de la mutation ? Et non pas d'une mutation en général

J'ai demandé à ma co tut et on va demander à nos vieux si besoin parceque je voudrais pas m'avancer pour eux !

[lorieb]

J'attend votre réponse alors, pas de problème, merci

[Yooouuupiii]

+1

[AnNévrisme]

Je vais répondre comme tel avec l'énoncé pour la mutation et expliquer le problème si on considère une mutation en général

Ici si on regarde bien Sma I coupe l'allèle muté et HpaI coupe l'allèle sain.

Ce qu'il faut comprendre c'est que la coupure et l'absence de coupure par une enzyme sont toutes les deux des informations à prendre en compte.

Effets de l'utilisation des enzymes SmaI et HpaI couplées:

• SmaI :

2 situations :
-si elle coupe on sait que l'allèle est muté pour cette mutation
-si elle ne coupe pas : soit l'allèle est sain soit il est muté mais pour une autre mutation (simplement la séquence obtenue avec cette autre mutation ex A> C est non reconnue par SmaI donc elle ne coupe pas) !

--> si on utilise SmaI uniquement on pourrait conclure sur cette mutation.en particulier

-A ce moment là : si SmaI ne coupe pas, si HpaI coupe -> on a notre réponse l'allèle est sain
S'il ne coupe pas -> l'allèle n'est apparemment pas sain MAIS il n'a pas non plus la mutation que nous recherchons

Bilan : avec SmaI et HpaI on a une idée de la présence ou non de la mutation

Attention : on a parlé avec nos vieux et en fait s'ils ont mis la réponse A c'est que la prof ne le dis pas mais en pratique apparemment c'est difficile de détecter un fragment non muté , c'est a dire que si le fragment est coupe on le saura facilement mais s'il n'est pas coupe on le saura difficilement on peut donc difficilement "miser" sur l'absence de coupure et il faudrait alors s'arranger pour obtenir forcément une coupure : on utilise SmaI si c'est la mutation cherchée ça coupe, et on utilise HpaI car si l'allèle n'est pas muté ça coupe aussi
---> dans les deux cas on obtient des fragments

La question va donc être envoyée à la prof, d'autant plus qu'elle a fait des remarques dans un sens différent donc restez vigilent à sa réponse quand on la publiera ---> sa réponse fera office de référence pour le concours +++ on va lui envoyer directement la question en général + ce QCM afin de voir en application ce qu'elle en pense

[AnNévrisme]

J'espère que ça vous va pour l'instant désolée de pas pouvoir vous éclairer plus mais c'est pas nous qui feront les qcms le jour j donc la version officielle reste celle de la prof

Bon courage à vous

[lorieb]

Si je comprend bien, on n'utilise pas les enzymes seules pour qu'il n'y ai pas pas de coupures c'est ça ? En n'ayant pas de coupures on n'est sur de rien et du coup on se débrouille pour toujours en avoir une ?

Si c'est bien comme ça que ça se passe, je comprend un peu mieux le principe.

J'attend la réponse officielle de la prof pour être sur de ce qu'elle veut qu'on comprenne.

Merci beaucoup pour cette explication hyper détaillée en tout cas, c'est top !

[AnNévrisme]

Ce serait ça oui

Oui dès qu'on aura la réponse on vous transmet ça !
Bon courage